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色谱柱的选择,对于分析方法建立和日常检测,重要么?选错了会怎样?
额,估计做过实验的人员都会懂选错柱子的痛:
这可将会产生塔板数低、柱床易变性、寿命变短、保留时间漂移,定量精度差,出现新的干扰峰等问题,要耗费大量的宝贵时间进行排查色谱峰异常。
于是。。。
每次面对色谱柱选择时,都十分纠结。
******的小编***近魏璎珞附体,马上为各位小主奉上:
色谱柱“选择困难症”良药!
据统计80%的有机化合物的都能在反相液相色谱方法下完成定性定量,而C18固定相制作工艺稳定性是目前公认******的,因此反相硅胶基质C18的应用占了反相色谱的70%。
那么:了解反相C18色谱柱厂商开发的三大技术方向,基本***能选择到合适的色谱柱!
改善碱性物质的峰型
解决峰型差影响定性定量******度的问题。
提高球形硅胶基质纯度
因为硅胶内金属杂质的存在,可使得硅醇基过度活化,以至某些碱性化合物在酸性条件下仍呈现拖尾峰,
所以硅胶只要纯度越高,填料基质对样品的出峰影响***越小。
这***是市面色谱柱厂商宣传“99.999%高纯硅胶”的原因。
其中我们常说的B类硅胶***是高纯硅胶,A类硅胶是早期的硅胶,含金属杂质比较多。
降低硅醇基含量
由于空间位阻的存在,键合反应***多只能覆盖50%的硅羟基,超过一半硅羟基是活性硅羟基,碱性分析物在硅胶柱基质C18色谱柱上容易产生的拖尾。
如果将有效封尾率提高,可避免残余硅醇基对碱性物质的吸附作用。
在C18链上嵌入极性基团
除了对填料进行封尾从而降低残余硅醇基,也能采用屏蔽活性硅醇基的策略,在C18链上嵌入一个极性基团。
因为极性基团的引入能够和流动相中的水形成氢键,使填料表面形成一层“水膜”,减弱了硅胶表面残留的硅羟基和碱性化合物的相互作用,从而极大地改善了碱性化合物的峰形。
此外极性基团还能改善对极性物质的保留。
提高极性化合物的保留
通过极性封尾,降低碳覆盖率,增加极性嵌入基团,保留更多的硅羟基,可解决极性较大的目标物在传统的C18基本无保留的问题。
采取以上的修饰方法后,可直接提高色谱柱的极性,
依据“相似相溶”的原理,极性物质***能很好的保留在色谱柱上,并且色谱柱能在100%水溶液流动相中稳定运行。
这类C18在市面也叫亲水性C18,简写为“AQC18”,特别适合分析酸性化合物。
增加硅胶基质色谱柱pH值使用范围
解决高纯硅胶的局限性,简化方法开发过程。
高纯硅胶并不是******的,具有一定的局限性。
当处于极限PH使用时,如PH<2时,硅醇基处于未解离的状态,此时碱性化合物保留不足;如PH>8时,硅醇基******解离,硅胶基体逐渐溶解。
而离子型化合物(酸、碱性、两性化合物)在色谱柱上的保留时间和选择性,会随着pH的变换而变化,较高pH条件下有利于增加碱性化合物的保留也有利于提高化合物质谱响应的灵敏度,
因此在方法开发时候耐受宽PH值的色谱柱***变得很有必要性了!
聚合物包被技术
因为化合物的稳定保留区都是在******PH条件下,所以宽pH值色谱柱对创建稳定
******的HPLC分析方法具有独特价值。
如E家色谱柱,通过在硅胶外层“镀上”一层聚合物,来抵挡高PH流动相的对脆弱硅胶的侵蚀。
杂化颗粒
如W家色谱柱,通过在硅胶填料的结构上嫁接了甲基或乙基,来增加颗粒表面溶解被腐蚀的难度,提高色谱柱******PH的耐受能力。
专利双齿键合技术
如A家色谱柱,采用了专利双齿键合技术和双封端技术。
双齿键合技术的“桥型”结构,相当于一个保护层,增加对高PH值的耐受能力。
灌下这碗良药,色谱柱“选择困难症”可是药到病除了?
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