参数   熟悉填料参数

填料种类、粒径、孔径、载量、比表面积等参数对分析分离的影响

固定相选择——色谱柱物理参数

色谱柱物理参数：                                

柱长、内径：4.6×250mm  粒径：1.7、3、5、10um  填料颗粒形状：球形、无定形  孔径：80Å、120Å、200Å、300Å    比表面积：100m  ~450m

色谱柱不同孔径下分离效果对比

诺氟沙星

Bio-C18-300 Å vs Bio-C18-200  Å

色谱柱柱：bio-c18
流动相：A：0.025米H PO pH值3
（调整的三乙胺），B：ACN
流量：1毫升/分钟
检测器：紫外278 nm
柱TEM：25度
注射量：20L

孔尺寸和表面积相互影响：孔径增加，表面积会以大致同样的比例缩小。******的可以进样量和表面积成正比。

色谱柱不同粒径下分离效果对比

色谱柱：proteomix WCX NP，4.6 x 50毫米
流动相A：20毫米磷酸钠缓冲液，pH值6.5，
流动相B：+ 1 M NaCl，流量：0.5毫升/分钟，温度：环境
梯度：0-25分钟从0-****，检测：214 nm
样本：5L注射核糖核酸酶A，细胞色素C和溶菌酶（1毫克/毫升）

填料颗粒物理构造

多孔颗粒 ——-经典的全多孔基质色谱柱 

表面多孔壳颗粒————核壳柱

灌注颗粒——-适用于叫高流速下大分子样品的制备分离

填料颗粒与色谱柱柱效关系

填料颗粒物理构造

适合高通量分析

在HPLC上达到UPLC的分离效果

低压下实现快速分析

快速检测

分析时间短，检测效率高

节省溶剂消耗

降低分析成本

色谱柱耐受性好，寿命长

仪器损耗降低

高分辨率

柱效高，检测灵敏度高

2.6um核壳柱可以达到多孔硅2um粒

径的分离效率

背压低

缺陷： 大浓度进样容易过载，不适合样品制备

Opalshell-C18色谱柱应用——中药

固定相选择——色谱柱化学参数

色谱柱化学参数

基质：硅胶、聚合物、其它

载量：键合相密度、碳载量

键合相：类型及方式

封端：技术和效果

硅胶优势：

高机械强度，高压下良好的耐受性

与不同的配基键合，分析不同样品

与水和所有有机溶剂兼容

尤其适用于梯度洗脱

缺点：

高pH条件下耐受性差，表面硅羟基带来碱性样品检测的的拖尾

聚合物优势：

良好的 pH耐受性

缺点：

色谱柱柱效较同粒径硅胶基质的低，在不同有机溶剂中出现不同程度的溶胀，不建议梯度洗脱