如何使用制备柱

成都摩尔科学仪器有限公司教你如何使用制备柱，如有需要欢迎拨打028-85115092。更多关于色谱技术支持，欢迎致电。

如何使用制备柱

应用领域 ——
A. 学校的天然药化、生药学、中药学、多肽等相关课题组
B. 大型原料药生产企业的研发机构
C. 大型医药研发机构
D. 外包型的药品相关企业
E. 其它机构

如何使用制备柱

如何选择制备柱

步骤	使用人员信息	目的
1	制备仪器的流速、耐压	初步确定******支持的制备柱直径
2	纯化产品类型－天然物、多肽还是小分子	大致确定制备柱长度，预计填料类型
3	需要纯化的产品量	根据载量估算制备柱的直径
4	需要纯化产品在分析柱上的条件	选择合适的填料

如何使用制备柱

***优状态下载量、流速与直径的关系

1

	长度250mm
直径（ mm ）	4.6	10	21.2	30	50
填料装填量（ g g ）	2.4	11.1	50	100.2	278
α α >1.3 载量（ mg ）	12	56	250	501	1390
α α <1.3  载量（ mg ）	0.24	1.1	5	10	28
工作流速 （ mL/min ）	1	8	21	43	110
较高流速（ mL/min ）	2	12	30	55	180

α = 分离度

制备柱的直径一般由载量决定。通常条件下，制备色谱柱的载量为装填量的0.01%~0.5%之间，如果载量过小，则样品易吸附在柱上难以洗脱；如果载量过高，可能造成部分样品无法吸附而直接流出

如何使用制备柱

平行放大理论－载量

• 首先需在分析柱上摸索出合适的条件，得到分析柱的载量
• 计算出 放大因子 SF

•  制备柱的载量 = SF × 分析柱上的载量

如何使用制备柱

•  假设从 250 × 4.6mm 分析柱放大到 250 × 21.2mm 制备柱
 • SF= （ 21.2 / 4.6 ）² × （ 250 / 250 ） =21.16
•  如果分析柱做超载试验，上样品能载 5 mg ，则估算出在制备柱的载量 5 5 × 21.16=105.8 mg ，如果制备柱的粒径和分析柱一样的话，则可以得到和分析柱一样的分离度

如何使用制备柱

•  和载量类似，先要摸索出分析柱上的条件
• 计算出流速的放大因子•  需要考虑到系统耐压的问题

平行放大理论－梯度条件

•梯度放大关键－流动相在单位时间内流过色谱柱的体积
•根据分析柱上的梯度时间来计算出制备柱上的梯度时间

•同样需要考虑系统耐压的问题
如何使用制备柱

制备时引导性的焦点问题－如何看待分离度

a) 合理利用超载 → 制备色谱的峰不需要和分析色谱一样分的很开，而是尽可能靠近与重叠

b) 选择******填料 → 直接决定分离度，进一步决定载量，如果载量够高的话，不重叠的峰可能比其它柱子重叠的峰单次纯化量更大

c) 极性与疏水性的选择正确与否很重要，道理同分析柱

制备时引导性的焦点问题－如何看待流速

a) 制备柱的流速***终由仪器决定 ，高流速意味着更高的效率，但是对柱床的冲击也更大，一定程度上会影响寿命

b) 每种规格的制备柱都有一个******流速，******流速下的压力即同比条件下分析柱的压力

c) 优先推荐 10μ的填料来增加流速的可调性。

制备时引导性的焦点问题－如何看待寿命

a) 绝大多数制备样品在酸性条件下进行，加 TFA 走梯度是***常见的。 TFA 酸性强，有时会造成键合的 C18 链的水解脱落，所以耐酸的填料会更好，成都摩尔科学仪器有限公司提供的 Amethyst  C18-H色谱柱等****** PH 为 1.5 ，****** pH 达 11.0 ，大多其他品牌的产品 pH 为2.0~8.0 ，因此 成都摩尔科学仪器有限公司提供的Amethyst  C18-H色谱柱具有更长的寿命。
b) 对于喜欢加 DMSO 增溶的实验室，建议尽量不加或少加；

c) 色谱柱柱头塌陷和污染造成的寿命缩短，是因为长期的高流速跑样品以及上样多杂质也多造成。因此加保护柱显得必要。

a) 进样前的处理 → 溶剂

b) 用 50 : : 50 的 DMSO : : 甲醇代替 ****DMSO 进样 → 减少样品在流动相中的析出
c) 增加梯度中 100 ％有机溶剂的时间段 → 减少残留

d) 使用制备型保护柱套 → 制备人员 一定要了解不用保护柱的后果有多严重。

制备柱的延伸产品

a) 制备大都从分析筛选方法，有时也从 LC- MS 快速筛选；成都摩尔科学仪器有限公司公司提供各种不同固定相各种规格的从 MS 柱到分析到制备。
b) 保护柱套和柱芯
c) 各种填料

d）联系电话028-85115092