色谱柱使用中的常见问题

1、色谱柱中的流动相是否会排干

 做实验室色谱分析的你是否会遇见忘记或者不小心没有补充流动性而导致泵将溶剂瓶子里面的流动相吸干了。

  hplc系统***因为这样而停止工作了，这样的操作行为会不会损坏色谱柱呢？泵是不是已经把色谱柱里面的所有流动相都排干了。色谱柱还能够继续的使用么？其实如果泵把流动相吸干的了是不会造成色谱柱损坏的。***算是泵里面装满了空气，泵也不会把空气流入色谱柱中。因为泵只能够传输液体而不能够输送空气，对比一下。还有一个可能***是你忘记了关闭色谱柱的密封盖或者色谱柱密封盖松弛而导致色谱柱变干。其实色谱柱的干涸情况是很少发生的，***算是有，也只是色谱柱的两端稍微干涸了一点，因为挥发所有溶剂是需要相当长的时间的。***算是色谱柱真的变干了也不一定***坏了。我们可以试着把色谱柱******脱气，然后冲洗色谱柱除去气体。这样色谱柱***能够恢复正常使用了

2、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题

 如果我们经常更换不同的色谱柱品牌或者改变色谱柱的流路。使用PEEK提供的材料管路和接头会比较简单。PEEK管路无需任何工具手动即可操作。并且可以调整锥箍之外的管路长度。很轻松的***能和其他品牌的色谱柱连接。

3、色谱柱的平衡时间

如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相******平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。      

流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。  

4、固定相稳定性

固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性******。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。

5、液相色谱柱污染    

保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。

污染源可以是流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。

样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，***可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。避免色谱柱污染***简单的方法是防患于未然。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。    

6、键合相疏水塌陷

当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近****的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或******不保留的现象，这***是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法是使用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。尤其是色谱柱长期储存也会发生此现象。

如何******良好的柱性能与柱寿命

1、样品应当尽可能溶解在能与流动相互溶的溶剂中。除特殊指明外，如使用强溶剂溶解样品柱子的分辨率将可能降低。

2、样品溶液在进样前应使用针头式过滤器对样品预先过滤。频繁改变流动相组成，会加速降低柱效。

3、色谱柱由高压匀浆法装填，能承受较高压力。为获得******分离效果，使用时请不要超过200kgf，而且避免压力突然上升或变化，否则会造成硅胶填料的破坏，减少色谱柱的使用寿命。除特殊要求外******操作温度不要超过60℃。

4、假如流动性里面有有酸物质或者无机盐那么我们应该用超过色谱柱20倍体积的离子水来进行冲洗。