液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除

液相色谱柱的柱子常规分析都可以基本可以说是正相色谱柱或者反向色谱柱。正相色谱柱一般是以硅胶为色谱柱。或者是在硅胶表面建和-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶色谱柱。反向色谱柱的话填料一般都是用硅胶做为基质，在它的表面层建和非极性十八烷基官能团（ODS）一般称为C18色谱柱。其他常规的反向柱子还有GP-C8色谱柱。GP-c18色谱柱等等。其他的还有离子色谱柱，亲和色谱柱，等等，本子主要介绍反向色谱柱的选择和使用

　　一、液相色谱柱反相色谱柱的选择
　　1.色谱柱的PH范围值的挑选
     反向色谱柱的有点是固定相比较稳定，使用范围广泛，可以用多种溶剂使用。但是硅胶为基质的填料。我们在使用的时候一定要注意流动性的PH范围，常规的c18色谱柱PH范围都在2-8.如果色谱柱的流动相ph值小于2的时候。***会导致键和相水解。如果色谱柱的流动相ph值大于7的时候，***会出息硅胶溶解。如果经常使用缓冲液固定相要进行降解。如果发现上面说的情况，会导致色谱柱的入口崩塌。相同填料但是不同品牌的色谱柱都不一样，。如果流动相ph高或者经常使用缓冲液，建业选择ph值范围比较大的柱子，推荐使用成都摩尔科学仪器有限的色谱柱。
　　
　　把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离;填料稳定性好了，组分的保留时间重现性***好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，******选用填料经端基封尾的色谱柱。
　　二、液相色谱柱的使用
　　色谱柱在使用前，******进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是******条件），只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
　　1、样品的前处理
　　a、******使用流动相溶解样品。
　　b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。
　　c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
　　2、流动相的配制
　　液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
　　a、流动相对样品具有一定的溶解能力，******样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。
　　b、流动相与样品不产生化学反应
　　c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果;降低柱压降，延长泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。
　　d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，******使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
　　e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
　　f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
　　3、流动相流速的选择
　　因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求******柱效，******使用******流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。
　　当选用******流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间（如使用反相色谱柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量）。
　　注意：
　　a.含水流动相******在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。******加入叠氮化钠，防止细菌生长。