液相色谱（HPLC）是上个世纪60年代发展起来的科学分离技术，是21世纪也***是现在的分离测定的重要手段，自从上个世界分离手段问世以来，因为它具有分离快，效率高，检测灵敏度好的特点，能够分析沸点高但是不能气化的活性物质所以被广泛应用与生物科技，液相色谱是用高压输液泵将不同极性的单一溶剂或者混合溶剂，缓冲液等流动相泵入装有固定相的液相色谱柱里面。再来经过阀注射待测样品，等待流动相把它带人柱管里面，。在柱管里面每个成分被分离之后进入检测器。色谱信号是根据记录仪，积分仪等信号来记录色谱工作。
     液相色谱***重要的地方是色谱柱，。在使用高效液相色谱仪的时候，保持色谱柱的柱效，柱温，样品物质等，是延长色谱柱使用寿命的重要办法。所以对液相色谱的维护是非常关键的。


    1 色谱柱常用的类型
    常 用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶、离子交换树脂、凝胶或玻璃微球等填充剂。在化学键合硅胶中以十六烷基硅烷键合硅胶***常用,辛基硅烷键合硅胶次之, 氰基或氨基键合硅胶也有使用。近年来,由于蛋白质等生物大分子物质分离提纯技术的飞速发展,离子交换色谱柱、凝胶色谱柱的应用也越来越广。 


2 哪些因素影响色谱柱的使用寿命  
2.1 流动相 

    在 以水溶液为流动相时,水溶液中的微生物例如细菌容易生长,当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时,一些霉菌可能在色谱柱中滋生,堵塞固定相颗粒间的空隙。由 于湿法填充技术的问世,目前普遍使用的色谱柱填料直径一般都小于10um,流动相中的颗粒杂质很容易先沉积在柱头然后慢慢堵塞柱子。流动相的pH值对色谱 柱也有影响,特别是对化学键合硅胶填料,水溶液的pH***适范围在2~7.5之间,当pH>8时,硅胶会释出生成絮状物堵塞柱子,且难以复原,柱效很 快降低,甚至******失效。当在缓冲液中加入有机溶剂例如甲醇或乙腈时,盐类的溶解度下降,会析出盐沉淀,堵塞柱子。同时流动相中的有机溶剂和盐会腐蚀色谱柱 头的筛板,产生柱头凹陷。流动相的极性对柱子也有一定影响,对于硅胶柱,甲醇、水、冰乙酸等极性较大物质会破坏填料,反之,对于化学键合硅胶,极性小的物 质如正丁醇、二氯甲烷等也起同样的作用。碱性溶液会破坏阳离子交换树脂色谱柱,而酸性溶液容易损坏阴离子交换树脂柱。 
2.2 固定相于样品


    如 果有少量或微量的样品不能够溶解在流动相中,在通过固定相会堵塞柱子。样品中的颗粒杂质也会堵塞柱子。样品组分例如糖、蛋白质等通过柱子时会产生不可逆吸 附,这样固定相的活性点被覆盖。样品组分还会与固定相产生反应,尤其是对于氨基柱的影响较为严重,因为氨基易与酐、酮形成希夫(Schiff)缩合而减少 活性点,使保留时间缩短。色谱柱键合相基团脱落、固定相分解和活性基团变性以及会影响柱效和保留时间的显著改变。大多数键合相都是通过硅氧硅键(Si- O-Si)连接在硅基质上,形成带有有机基团的固定相Si-O-Si-R(R为CnH2n+1),硅氧硅键可能在水溶液中水解而断裂,使键合基团脱落。