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技术知识

如何更好的使用色谱柱

发布时间: 2019-01-21 14:37   322 次浏览

1、拿到色谱柱后先阅读说明书,了解色谱柱的具体性能:耐受温度、耐受PH等。以及色谱柱的冲洗和保存条件。经过柱校测试确认色谱柱本身没有问题后方可正常使用。


2、样品充分前处理,确保样品的洁净;使用保护柱或在线过滤器,根据实际情况更换保护柱芯或滤片。


3、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。


4、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中如果流动相中使用了缓冲盐,避免出现盐析。



5、选择使用适宜的流动相(尤其是PH),以避免固定相被破坏,PH过低共价键断裂,键和相水解;PH过高硅胶溶解。


6、色谱柱使用过程中,如果压力升高,或出现污染,选择适当的条件冲洗或反冲。

 

适用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱体积的含有≥30%谁的极性邮寄溶剂(如乙腈)作为流动相除去柱子中的缓冲盐;使用至少20倍柱体积的含有95%极性邮寄溶剂(如乙腈)冲洗色谱柱。


污染物的去除常规星期后柱校没有明显恢复时,使用50%异丙醇/乙腈以低流速清洗20倍柱体积以除去污染物。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛分针对自己品牌的反相色谱柱冲洗的参考意见)


适用于氨基柱、氰基柱

常规清洗:乙腈:水=60:40条件对色谱柱进行冲洗,清洗时不建议水相比例超过40%,过高使用水相容易导致键和相水解。


色谱柱再生:当色谱柱经过长期使用,柱校降低时,可以对色谱柱进行再生,乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40条件冲洗30倍柱体积。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛分针对自己品牌的色谱柱冲洗的参考意见)

 

适用于离子交换柱SCX、SAX冲洗方法

日常冲洗:用100%水冲洗30个柱体积除盐,然后用20%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在20%甲醇或乙腈中。


长期保存:用100%水冲洗30个柱体积去除盐,然后用50%乙腈;50%水冲洗20个柱体积后保存在50%乙腈:50%水中。


再生:先用高浓度的缓冲盐(不超过1M),然后再用100%水洗,100%乙腈或甲醇冲洗,再用20%乙腈或甲醇保存。(以上操作可根据实验室自身SOP视情况而定,此方法仅为赛分针对自己品牌的色谱柱冲洗的参考意见)




 
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