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技术知识

琳琅满目的色谱柱如何选择

发布时间: 2017-09-19 10:12   2725 次浏览

在液相色谱分析方法中***重要的***是色谱柱的选择,色谱分析人员面对几百种色谱柱,我们该怎么选择自己的色谱柱呢?


  现在商品化的液相色谱柱琳琅满目,根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择,但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异,即使都是C18色谱柱,同一品牌不同系列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐高温的、有适合碱性样品的等等。所以在选择色谱柱前要好好研究色谱柱参数,仔细阅读色谱柱说明书,才能找到合适的色谱柱和适宜的分离方法。


  目前市场上主要以液相色谱为主,约占80%的比例。


  在了解了液相色谱的基本知识后,液相色谱的选择也***迎刃而解了。


  柱长及内径的选择


  长度的选择:柱越长,总柱效越高(n值越大),柱越长,分析时间也越长。250—300mm是***普遍的柱长,实验室一半以上的工作都是采用此规格柱子,一般用来分离l0到50个组份的中等至复杂混合物;500—600mm,要求较高分辨率的应用,—般用来分离大于50个组份或包含有难分离物质的复杂样品程序升温分析。



  内径:柱效率与柱半径平方成反比,内径越小柱效越高,但内径越大,柱容量也增加,允许进样量***越多。当进样量超过柱容量时,则因柱内每块理论板内不能建立真正的平衡,将会导致色谱蜂畸变,柱分辨率降低,重现性不好。因此对于复杂样品需要******分离,必须使用小内径柱子。另一方面若样品中存在具有很不相同浓度组份化合物,为了增加样品容量***必须使用内径大的柱子,目前实验室使用***常见的柱子内径一般是4.6mm。


  一般选择原则:分析大分子量化合物选择大孔径色谱柱;对于高pH值或者碱性化合物需要选择高封端或者特殊封端的色谱柱,以改善峰形,延长色谱柱使用寿命等。


  液相色谱也叫层析法,它是一种高效能的物理分离技术,将它用于分析化学并配合适当的检测手段,***成为色谱分析法。液相色谱***早应用于分离植物色素,其方法是这样的:在一玻璃管中放入碳酸钙,将含有植物色素(植物叶的提取液)的石油醚倒入管中。此时,玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗,随着石油醚的加入,谱带不断地向下移动,并逐渐分开成几个不同颜色的谱带,继续冲洗***可分别接得各种颜色的色素,并可分别进行鉴定。液相色谱也由此而得名。


  现在的液相色谱早已不局限于色素的分离,其方法也早已得到了极大的发展,但其分离的原理仍然是一样的,在液相色谱中存在两相,其中一相是固定不动的,称为固定相;另一相则不断流过固定相,称为流动相。液相色谱的分离原理***是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时,混合物中的各组分与固定相发生相互作用。


  液相色谱由于混合物中各组分在性质和结构上的差异,与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同,随着流动相的移动,混合物在两相间经过反复多次的分配平衡,使得各组分被固定相保留的时间不同,从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合,实现混合物中各组分的分离与检测。

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