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技术知识

色谱柱切换方法

发布时间: 2018-11-15 12:58   5870 次浏览

小编***近在工作过程当中,遇到几份不同的分析方法,都在柱切换的过程当中对细节没有把控到位。所以,今天我们***来谈谈柱切换的那些事情。


关于相互等效的色谱柱,小编发现很多小伙伴已经都记下了,这点在前述的很多篇文章中均有提及。

色谱柱切换图片






对比某个分析方法,发现与药典方法除了色谱柱规格不一致以外,包括温度、梯度、甚至是色谱柱品牌型号在内的所有其他条件均一致。色谱柱规格差异在于:1、150*4.6,3um;2、250*4.6,5um。


哪里有问题呢?相同的柱效,同样的线速度。


相同的内径提示同样的流速即可******相同的线速。若上述柱切换的方法为等度方法,则仅仅只需增加洗脱时间即可。但是,对于梯度方法,由于切换前后柱体积发生了变化,若要******梯度变化相同,则需要******洗脱的柱体积倍数相同。如果更严格一些,还应当包括不同仪器间系统死体积的差异。



不同规格色谱柱间的梯度洗脱程序存在如下等式:





从上述等式可以看出,当流速一致,色谱柱内径一致,梯度维持时间与柱长成正比。也***是说,色谱柱越长,梯度持续的时间越久。


转换非常简单,如果在这个基础上还想偷懒。也行!各家的软件中,官网上都附带各种梯度转换的计算,大家可以去尝试一下。只需输入系统死体积及柱1,柱2的规格,全程自动,无需使用计算器。


当然,上述的转换只针对一致的填料间的转换。在前述的很多篇文章中也一直强调,不同填料色谱柱之间选择性是有差异的,是无法进行这种不同规格上的等效转换的。


另外,在转换过程当中,需要关注系统体积差异带进来的扩散效应,特别是从长柱切换到高效柱的方法中。柱外体积对小柱子的影响更为明显。这也是为何小编一直强调除了理解理论知识以外,多去看看硬件,很多问题并不单纯是方法带来的。


不同品种的方法,有着不同的策略。理解方法开发之初的目的和策略,定能让我们的工作事半功倍。


 
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